Estado de la resistencia a insecticidas en Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) del municipio Pinar del Río / Situation of resistance to insecticides in Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) from Pinar del Rio municipality

Introducción: el programa de control de Aedes aegypti (Linnaeus) (Diptera: Culicidae) en Cuba utiliza temefos como larvicida y piretroides como adulticidas, aunque el organofosforado clorpirifos ha sido utilizado esporádicamente. Conocer el nivel de resistencia a estos insecticidas es esencial para lograr un control efectivo de esta especie. Objetivo: determinar el nivel de resistencia a insecticidas en su grado técnico y en sus formulaciones comerciales en Ae. aegypti de Pinar del Río. Métodos: una cepa de Ae. aegypti del Área de Salud Raúl Sánchez, Pinar del Río, fue evaluada a través de los bioensayos de la Organización Mundial de la Salud para determinar la susceptibilidad en larvas al organofosforado temefos en su formulación técnica. Se evaluaron además tres formulaciones granuladas de temefos (Abatex-G1, Biolarv G-1 y Temefar G-1). En el estado adulto se determinó el nivel de susceptibilidad a los insecticidas piretroides: cipermetrina, deltametrina, lambdacialotrina y al organofosforado clorpirifos, en su formulación técnica. Además se evaluaron algunos en su formulación comercial: Galgotrin 25 EC (cipermetrina), Aqua K-Otrina 2 EW (deltametrina) y Clorcide 44 EC (clorpirifos). Resultados: en larvas, se encontró alta resistencia a temefos, en su formulación técnica, y con los productos en su formulación comercial, se observó una efectividad del 100 por ciento, con recambio diario de agua, de hasta 20 días para Temefar G1, 18 días para Biolarv G1 y 12 días para Abatex G1. En los ensayos de adultos, la cepa resultó susceptible a cipermetrina, deltametrina y clorpirifos, y resistente a lambdacialotrina. Con respecto a las tres formulaciones comerciales evaluadas, solo se observó resistencia a Aqua K-Otrina 2 EW. Conclusiones: el uso de estrategias de control integrado de Ae. aegypti se hace necesario para disminuir la frecuencia de uso de temefos, y así recuperar la efectividad de este insecticida. Además, se evitaría la aparición de resistencia a productos adulticidas que aun mantienen su efectividad para el control efectivo de esta especie en la zona de estudio(AU)

Introduction: the control program of Aedes aegypti (Linnaeus) (Diptera: Culicidae) in Cuba uses temephos as larvicide and pyrethroids as adulticide although the organophosphorate chlorpyrifos has been barely used. The level of knowledge about resistance to insecticides is essential to effectively control this species. Objective: to determine the level of resistance to insecticides of Ae. aegypti from Pinar del Rio in its technical aspect and in commercial formulations. Methods: one Ae. aegypti strain from the health area Raul Sánchez in Pinar del Rio province was evaluated through the World Health Organization bioassays to determine susceptibility of larvae to temephos in its technical formulation. Additionally, three granulated formulations of temephos were evaluated (Abatex-G1, Biolarv G-1 and Temefar G-1). In the adult state, the level of susceptibility to pyrethroids called cypermethrin, deltamethrin, lambda cyhalothrine and to organophosphate chlorpyrifos in its technical formulation. Some of them were evaluated in its commercial formulation (Galgotrin 25 EC (cypermethrin), Aqua K-Otrina 2 EW (deltamethrin) and Clorcide 44 EC (chlorpyrifos). Results: it was found in larvae that the resistance to temephos was high in the technical formulation, but the commercial formulation showed an effectiveness rate of 100 percent., with daily change of water, up to 20 days for Temefar G1, 18 days for Biolarv G1 and 12 for Abatex G1. In the assays with adult vectors, the strain turned to be susceptible to cypermethrin, deltamethrin and chlorpyrifos and resistant to lambda cyhalothrin. Regarding the three evaluated commercial formulations, resistance to Aqua K-Otrina 2 EW was proved. Conclusions: the use of integrated control strategies for Ae. aegypti makes it necessary to reduce the frequency of use of temephos and to recover the effectiveness of this insecticide. Moreover, it will avoid the occurrence of resistance to adulticide products that are still effective for the control of this species in the study area(AU)

Toxicological and biochemical analysis of the susceptibility of sylvatic Triatoma infestans from the Andean Valley of Bolivia to organophosphate insecticide

To increase our knowledge of the natural susceptibility of Triatoma infestans to an organophosphate insecticide, we performed toxicological and biochemical studies on three sylvatic populations from Bolivia and two populations from domestic dwellings from Bolivia and Argentina. Fifty-per-cent lethal doses (LD50) were determined based on the topical application of fenitrothion on first instar nymphs and mortality was assessed at 24 h. Both type of populations exhibited LD50ratios significantly higher than 1 with a range of the values (1.42-2.47); the maximum value were found in a sylvatic (-S) population, Veinte de Octubre-S. Samples were biochemically analysed using a glutathione S-transferase activity assay. The highest significant activity was obtained for Veinte de Octubre-S and the lowest activity was obtained for the reference population (102.69 and 54.23 pmol per minute per mg of protein respectively). Two out of the three sylvatic populations (Veinte de Octubre-S and Kirus Mayu-S) exhibited significantly higher glutathione S-transferase activity than that of the reference population. Based on this analysis of the natural susceptibility of this organism to organophosphate insecticides, continental and focal surveys of organophosphate susceptibility should be conducted to evaluate the evolution and distribution of this phenomenon.

Caracterización parcial de la actividad de esterasas en una cepa de Aedes aegypti resistente a temefos / Partial characterization of esterase activity in a temephos-resistant Aedes aegypti strain

Introducción: las enzimas esterasas han sido identificadas como mecanismo de resistencia a temefos en Aedes aegypti de Cuba, larvicida más utilizado en el mundo. Objetivo: caracterizar parcialmente la actividad de esterasas en larvas expuestas y no expuestas a dosis subletales de temefos en una cepa de Aedes aegypti resistente a este insecticida. Métodos: se utilizó una cepa de Aedes aegypti de referencia susceptible (Rockefeller) y otra resistente a temefos (SANtemF11). Se expusieron las larvas de la cepa SANtemF11 a la concentración letal 90 (CL90) de temefos (1 ppm), 10 % de larvas sobrevivientes a las 24 h (SANtem [24 h]) se transfirieron a agua limpia y sin exposición a insecticidas por otras 24 h (SANtem [48 h]). Se caracterizó de modo parcial, en estas larvas, la actividad de esterasas a través de ensayos bioquímicos y electroforesis en gel de poliacrilamida. Se estimó por duodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) el peso molecular de la esterasa (Est. A4). Resultados: la actividad de esterasas en la cepa SANtemF11 resultó significativamente mayor que en Rockefeller. Se observó una disminución significativa de la actividad de esterasas en las larvas sobrevivientes (SANtemF11 [24 h]), la cual se recuperó 24 h después sin exposición a temefos. En el zimograma se observó que en 10 % de las larvas sobrevivientes a temefos, solo apareció incrementada la banda de esterasa A4, en comparación con las observadas en SANtemF11. El peso molecular estimado de la esterasa A4 fue de 58 kDa. Conclusiones: la presencia de una banda específica de esterasa (58 kDa), en las larvas sobrevivientes a la selección con temefos, confirma su papel en la resistencia a este insecticida. Diagnosticar la función de las esterasas en la resistencia a temefos, a través de ensayos bioquímicos, no debe realizarse en larvas expuestas a dosis subletales de este insecticida, para evitar falsos negativos.

Introduction: the esterase enzymes have been defined as the mechanism of resistance to temephos in Aeges aegypti in Cuba, which is the most used larvacide worldwide. Objective: to partially characterize the activity of esterases in exposed and non-exposed larvae at sublethal doses of temephos in an Aedes aegypti strain that is resistant to this product. Methods: a susceptible reference Aedes aegypti strain (Rockefeller) and another temephos-resistant strain (SANtemFII) were used. The larvae from SANtemF11 strain were exposed to lethal concentration 90 (LC90) of temephos (1 ppm); 10 % of the surviving larvae after 24 hours (SANtem[24 h] was moved to clean water, with no exposure to insecticide for 24 hours (SANtem [48 h]). The activity of esterases was partially characterized in these larvae through biochemical assays and gel-polyacrylamide electrophoresis. The molecular weight of esterase A 4 (ESt. A4) was estimated with the support of sodium duodecyl sulophate (SDS-PAGE). Results: the activity of esterases in SANtemF11 was significantly higher than in Rockefeller strain. Significant reduction of the activity of esterases in surviving larvae was observed (SANtemF11 [24 h], but it increased 24 h later without exposure to temephos. The zymogram showed that 10% of larvae that survived from temephos action, just the esterase A4 band increased if compared with those of SAntemF11. The estimated molecular weight of esterase A4 was 58 kDa. Conclusions: the presence of a specific band of esterase (58 kDa) in surviving larvae confirmed the role of these enzymes in insecticidal resistance. The diagnosis of the function of the esterases in resistance to temephos through biochemical tests should not be made in larvae exposed to sublethal doses of this insecticide, in order to avoid false negatives.

Impact of environmental temperatures on resistance to organophosphate insecticides in Aedes aegypti from Trinidad / Repercusión de las temperaturas ambientales sobre la resistencia de Aedes aegypti a los insecticidas organofosforados en Trinidad

OBJECTIVE: To examine the effects of increasing larval rearing temperatures on the resistance status of Trinidadian populations of Aedes aegypti to organophosphate (OP) insecticides. METHODS: In 2007-2008, bioassays and biochemical assays were conducted on A. aegypti larvae collected in 2006 from eight geographically distinct areas in Trinidad (Trinidad and Tobago). Larval populations were reared at four temperatures (28 ± 2ºC, 32ºC, 34ºC, and 36ºC) prior to bioassays with OP insecticides (fenthion, malathion, and temephos) and biochemical assays for esterase enzymes. RESULTS: Most larval populations reared at 28 ± 2ºC were susceptible to fenthion (>98% mortality) but resistant to malathion and temephos (< 80% mortality). A positive association was found between resistance to OP insecticides and increased activities of α- and β-esterases in larval populations reared at 28 ± 2ºC. Although larval populations reared at higher temperatures showed variations in resistance to OPs, there was a general increase in susceptibility. However, increases or decreases in activity levels of enzymes did not always correspond with an increase or decrease in the proportion of resistant individuals reared at higher temperatures. CONCLUSIONS: Although global warming may cause an increase in dengue transmission, based on the current results, the use of insecticides for dengue prevention and control may yet be effective if temperatures increase as projected.

OBJETIVO: Examinar los efectos del aumento de las temperaturas de desarrollo larvario sobre el estado de resistencia a los insecticidas organofosforados de las poblaciones de Aedes aegypti en Trinidad. MÉTODOS: En 2007 y 2008 se llevaron a cabo ensayos biológicos y bioquímicos en larvas de A. aegypti recogidas en el 2006 de ocho áreas geográficamente separadas en Trinidad (Trinidad y Tabago). Las poblaciones larvarias se desarrollaron en cuatro temperaturas (28 ± 2 ºC, 32 ºC, 34 ºC y 36 ºC) antes de los ensayos biológicos con insecticidas organofosforados (fentión, malatión y temefós) y los análisis bioquímicos para las enzimas de esterasa. RESULTADOS: La mayoría de las poblaciones larvarias que se desarrollaron a 28 ± 2 ºC fueron susceptibles al fentión (mortalidad > 98%) pero resistentes al malatión y al temefós (mortalidad < 80%). Se encontró una asociación positiva entre la resistencia a los insecticidas organofosforados y la mayor actividad de αy β-esterasas en las poblaciones larvarias que se desarrollaron a 28 ± 2 ºC. Aunque las poblaciones larvarias que se desarrollaron a temperaturas mayores mostraron variaciones en la resistencia a los organofosforados, hubo un aumento general de la sensibilidad. Sin embargo, los aumentos o las disminuciones en los niveles de actividad de las enzimas no siempre se correspondieron con un aumento o disminución en la proporción de individuos resistentes desarrollados a las temperaturas más altas. CONCLUSIONES: Aunque el recalentamiento del planeta puede causar un aumento de la transmisión del dengue, según los resultados de este estudio el uso de insecticidas para la prevención y el control del dengue todavía puede ser eficaz si las temperaturas aumentan según lo proyectado.

Identificación de polimorfismos en RXam2, un gen candidato de resistencia a la bacteriosis vascular de yuca / Identification of polymorphisms in RXam2 a cassava bacterial blight resistance gene candidate

La yuca se constituye en la base de la alimentación para más de mil millones de personas en el mundo. Una de las principales enfermedades de la yuca y que podría comprometer la seguridad alimentaria es la bacteriosis vascular ocasionada por la bacteria Xanthomonas axonopodis pv. manihotis (Xam). El gen candidato de resistencia RXam2 codifica para una proteína con dominios NBS (Nucleotide Binding Site) y LRR (Leucine Rich Repeats) y colocaliza con un QTL (Quantitative Trait Loci) que explica el 61.6% de la resistencia a la cepa CIO151 de Xam. En este trabajo se secuenció parcialmente el gen RXam2 en tres variedades de yuca: MCOL2246, TMS60444 y SG107-35 con el objetivo de tener una visión preliminar del grado de polimorfismos tipo SNP (Single Nucleotide Polymorphism) que se presenta en este gen. La región secuenciada incluye 507 pb de la región promotora y 1309 pb de la secuencia codificante. Se logró identificar 5 y 31 SNPs al interior de las variedades MCOL2246 y TMS60444, respectivamente. Al mismo tiempo el número de SNPs entre las variedades fue de 44, 34 y 23 para MCOL2246-TMS60444, TMS60444-SG107-35 y MCOL2246-SG107-35, respectivamente. El mayor número de SNPs estuvieron localizados en la región -500 a -300 pb que corresponden a un fragmento de la región promotora del gen, aunque también se identificó un importante número de polimorfismos en la región codificante. Este estudio permitirá identificar el número de polimorfismos en este gen en un mayor grupo de variedades de yuca con el fin de asociar estos polimorfismos con el fenotipo de resistencia/susceptibilidad.

Cassava is a staple food for more than a billion people. One of the major diseases of cassava which could compromise food security is known as cassava bacterial blight, caused by the bacterium Xanthomonas axonopodis pv. manihotis (Xam). The RXam2 resistance gene candidate encodes a protein with Nucleotide Binding Site and Leucine Rich Repeats domains, and colocalizes with a QTL (Quantitative Trait Loci) that accounts for 61.6% of the resistance to the Xam strain CIO151. In this work we sequenced 1816 bp corresponding to a partial sequence of this gene in three cassava varieties with the aim of having a preliminary overview of the degree of Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs). The sequenced regions included 507 bp of the promotor and 1309 bp of the coding sequence. It was possible to identify five and 31 intravarietal SNPs in MCOL2246 and TMS60444, respectively. In addition, the number of SNPs between varieties was 44, 34 and 23 for MCOL2246-TMS60444, TMS60444-SG107-35 and MCOL2246-SG107-35, respectively. The largest number of SNPs was located in the promoter region -500 to -300 bp. This study may help to develop alternatives to identify SNPs in a more diverse group of cassava varieties, and possibly associate them with resistance/susceptible phenotypes.

Monitoramento da suscetibilidade ao piretróide Deltametrina em populações de Triatoma sordida Stål, 1859 (Hemiptera: Reduviidae)

A resistência de triatomíneos a inseticidas já foi relatada na Venezuela, Argentina e Bolívia, sendo possível a existência de outros focos em regiões ainda mais amplas. Deste modo, torna-se necessário desenvolver estudos que investiguem a dispersão geográfica desses vetores resistentes, bem como os mecanismos envolvidos, com vistas a elaborar estratégias adequadas às necessidades locais, ou até mesmo que impeçam o aparecimento deste fenômeno. O objetivo deste estudo foi padronizar ensaios biológicos para monitoramento de resistência de triatomíneos a inseticidas em laboratório e caracterizar a suscetibilidade de quatorze populações de Triatoma sordida Stal, 1859 de Minas Gerais (Sudeste do Brasil) ao piretróide Deltametrina. A área em que os triatomíneos foram coletados foi submetida ao controle químico por cerca de 30 anos. A linhagem referência de suscetibilidade é oriunda de Uberaba. A metodologia foi orientada pelas recomendações da WHO (1994) e OPS (2005), tendo sido redefinidos alguns detalhes técnicos (dose diagnóstica adequada para triagem de resistência em triatomíneos, local ideal de aplicação do inseticida nas ninfas I, idade e geração dos insetos utilizados). A linha base de suscetibilidade da linhagem referência foi inicialmente determinada. A Deltametrina, solubilizada em acetona, foi aplicada topicamente no dorso do abdômen de ninfas I da geração F2 (cinco dias de idade, jejum, ± 1,2 mg. de peso) com auxílio de uma microseringa.

Os resultados dos ensaios dose-resposta foram analisados com auxílio do programa PROBIT (Finney, 1971). Em seguida, as populações de campo foram submetidas a dose diagnóstica de 1XDL99 da linhagem referência de suscetibilidade e 2XDD99 da linhagem referência de suscetibilidade. Todas as populações apresentaram-se menos suscetíveis ao inseticida quando comparadas com a linhagem referência de suscetibilidade. As razões de resistência encontradas variaram de 2,6 a 6,8. A comparação de um fragmento de DNA de 317 pb do gene mitocondrial do citocromo b (mtCytB) foi usada para inferir sobre a variabilidade genética das quatorze populações de T. sordida estudadas. Inferências filogenéticas, usando P. megistus como grupo externo, não revelaram a formação de clados. Os 150 espécimes analisados apresentaram 50 haplótipos gerando uma diversidade (Hd) de 0,831. Foi possível distinguir seis populações geneticamente diferentes. Análise do Network revelou a presença de vários loops, demonstrando homoplasia e a ocorrência de mutações reversas/paralelas. Com o marcador genético utilizado não foi possível estabelecer correlação entre a variabilidade genética das populações estudadas e a resistência a Deltametrina. Giordano et al. (2005) sugerem que os microssatélites podem ser uma ferramenta mais sensível e eficiente para este objetivo. A possível natureza bioquímica da resistência encontrada está sendo verificada

Monitoramento da suscetibilidade ao piretróide Deltametrina em populações de Triatoma sordida Stal, 1859 (Hemiptera: Reduviidae) / Monitoring susceptibility to pyrethroid deltamethrin in populations of Triatoma sordida Stal, 1859 (Hemiptera: Reduviidae)

A resistência de triatomíneos a inseticidas já foi relatada na Venezuela, Argentina e Bolívia, sendo possível a existência de outros focos em regiões ainda mais amplas. Deste modo, torna-se necessário desenvolver estudos que investiguem a dispersão geográfica desses vetores resistentes, bem como os mecanismos envolvidos, com vistas a elaborar estratégias adequadas às necessidades locais, ou até mesmo que impeçam o aparecimento deste fenômeno. O objetivo deste estudo foi padronizar ensaios biológicos para monitoramento de resistência de triatomíneos a inseticidas em laboratório e caracterizar a suscetibilidade de quatorze populações de Triatoma sordida Stal, 1859 de Minas Gerais (Sudeste do Brasil) ao piretróide Deltametrina. A área em que os triatomíneos foram coletados foi submetida ao controle químico por cerca de 30 anos. A linhagem referência de suscetibilidade é oriunda de Uberaba. A metodologia foi orientada pelas recomendações da WHO (1994) e OPS (2005), tendo sido redefinidos alguns detalhes técnicos (dose diagnóstica adequada para triagem de resistência em triatomíneos, local ideal de aplicação do inseticida nas ninfas I, idade e geração dos insetos utilizados). A linha base de suscetibilidade da linhagem referência foi inicialmente determinada. A Deltametrina, solubilizada em acetona, foi aplicada topicamente no dorso do abdômen de ninfas I da geração F2 (cinco dias de idade, jejum, ± 1,2 mg. de peso) com auxílio de uma microseringa.

Os resultados dos ensaios dose-resposta foram analisados com auxílio do programa PROBIT (Finney, 1971). Em seguida, as populações de campo foram submetidas a dose diagnóstica de 1XDL99 da linhagem referência de suscetibilidade e 2XDD99 da linhagem referência de suscetibilidade. Todas as populações apresentaram-se menos suscetíveis ao inseticida quando comparadas com a linhagem referência de suscetibilidade. As razões de resistência encontradas variaram de 2,6 a 6,8. A comparação de um fragmento de DNA de 317 pb do gene mitocondrial do citocromo b (mtCytB) foi usada para inferir sobre a variabilidade genética das quatorze populações de T. sordida estudadas. Inferências filogenéticas, usando P. megistus como grupo externo, não revelaram a formação de clados. Os 150 espécimes analisados apresentaram 50 haplótipos gerando uma diversidade (Hd) de 0,831. Foi possível distinguir seis populações geneticamente diferentes. Análise do Network revelou a presença de vários loops, demonstrando homoplasia e a ocorrência de mutações reversas/paralelas. Com o marcador genético utilizado não foi possível estabelecer correlação entre a variabilidade genética das populações estudadas e a resistência a Deltametrina. Giordano et al. (2005) sugerem que os microssatélites podem ser uma ferramenta mais sensível e eficiente para este objetivo. A possível natureza bioquímica da resistência encontrada está sendo verificada

Resistência do Aedes fluviatilis (Lutz, 1904) ao Bacillus thruringiensis israelensis (Goldberg e Margalit, 1977) e a infecção pelo Plasmodium gallinaceum (Brumpt, 1935) / Resistance of Aedes fluviatilis (Lutz, 1904) to Bacillus thruringiensis israelensis (Goldberg and Margalit, 1977) and infection by Plasmodium gallinaceum (Brumpt, 1935)

A família Culicidae é de fundamental importância médica porque transmite vários patógenos ao homem incluindo aqueles que causam a malária. O Aedes fluviatilis infectado com Plasmodium gallinaceum tem sido usado como modelo para estudar a interação entre os parasitas da malária e os mosquitos vetores. Foi analisado o uso do Bacillus thuringiensis var. isralensis (B.t.i.), da resistência aos inseticidas convencionais e dos problemas no meio ambiente causado pelo seu uso prolongado. Contudo, poucos estudos têm considerado o potencial de resistência dos insetos aos patógenos naturais. Para verificar essa possibilidade e entender como o B.t.i. pode afetar a taxa de infecção da malária no mosquito vetor em áreas tratadas, foi testada a habilidade vetorial da população de Ae. fluviatilis selecionada para resistência em condições laboratoriais. Em nossos bioensaios, a DL50 apresentou um aumento de 7,5 vezes de resistência na 2° geração (F2). Os intestinos médios de adultos tratados com B.t.i. e processados para SDS-PAGE não demonstraram a presença de uma banda 206 kDa presente nos mosquitos adultos não tratados com o patógeno. A análise estatística de Ae. fluviatilis tratados e não tratados com B.t.i. infectados com P. gallinaceum e insetos não tratados infectados não mostraram diferenças significativas nas taxas de infecção, avaliadas pelo número de oocistos presentes nos intestinos médios. A análise dos estômagos dos mosquitos revelou que os perfis moleculares, obtidos pela análise de LS-PCR dos indivíduos não tratados diferem dos daqueles insetos expostos ao B.t.i., já que a LS-PCR amplificou uma banda de aproximadamente 620 pb nos mosquitos controles. Esses perfis se mantiveram os mesmos tanto para um indivíduo quanto para os “pools”, na microvilosidade dos intestinos de adultos e larvas tratados com B.t.i. Portanto, o Ae. fluviatilis exposto ao B.t.i. exibiu certas alterações bioquímicas, fisiológicas, e moleculares e de resistência, porém os nossos estudos não foram capazes de demonstrar alteração na capacidade vetorial.

Resistência do Aedes fluviatilis (Lutz, 1904) ao Bacillus thruringiensis israelensis (Goldberg e Margalit, 1977) e a infecção pelo Plasmodium gallinaceum (Brumpt, 1935)

A família Culicidae é de fundamental importância médica porque transmite vários patógenos ao homem incluindo aqueles que causam a malária. O Aedes fluviatilis infectado com Plasmodium gallinaceum tem sido usado como modelo para estudar a interação entre os parasitas da malária e os mosquitos vetores. Foi analisado o uso do Bacillus thuringiensis var. isralensis (B.t.i.), da resistência aos inseticidas convencionais e dos problemas no meio ambiente causado pelo seu uso prolongado. Contudo, poucos estudos têm considerado o potencial de resistência dos insetos aos patógenos naturais. Para verificar essa possibilidade e entender como o B.t.i. pode afetar a taxa de infecção da malária no mosquito vetor em áreas tratadas, foi testada a habilidade vetorial da população de Ae. fluviatilis selecionada para resistência em condições laboratoriais. Em nossos bioensaios, a DL50 apresentou um aumento de 7,5 vezes de resistência na 2° geração (F2). Os intestinos médios de adultos tratados com B.t.i. e processados para SDS-PAGE não demonstraram a presença de uma banda 206 kDa presente nos mosquitos adultos não tratados com o patógeno.

A análise estatística de Ae. fluviatilis tratados e não tratados com B.t.i. infectados com P. gallinaceum e insetos não tratados infectados não mostraram diferenças significativas nas taxas de infecção, avaliadas pelo número de oocistos presentes nos intestinos médios. A análise dos estômagos dos mosquitos revelou que os perfis moleculares, obtidos pela análise de LS-PCR dos indivíduos não tratados diferem dos daqueles insetos expostos ao B.t.i., já que a LS-PCR amplificou uma banda de aproximadamente 620 pb nos mosquitos controles. Esses perfis se mantiveram os mesmos tanto para um indivíduo quanto para os “pools”, na microvilosidade dos intestinos de adultos e larvas tratados com B.t.i. Portanto, o Ae. fluviatilis exposto ao B.t.i. exibiu certas alterações bioquímicas, fisiológicas, e moleculares e de resistência, porém os nossos estudos não foram capazes de demonstrar alteração na capacidade vetorial.

Glutatión S-transferasas en no-vertebrados y en mamíferos: su importancia en la detoxificación de insecticidas / The Glutathione S-transferases (GST) of non-vertebrate organisms and mammals

Las Glutatión S-transferasas (GST) de organismos no-vertebrados no han sido estudiadas con la misma intensidad que las de mamíferos. El interés en las GST en no-vertebrados radica en su importancia como protección bioquímica de los organismos expuestos a compuestos químicos ambientales. En efecto, se ha observado que niveles elevados de GST podrían estar asociados con la tolerancia a pesticidas. La intención de esta actualización es revisar el nivel de conocimiento actual sobre estas enzimas en no-vertebrados, comparándolas con las de mamíferos. Evaluar la contribución de estos estudios al conocimiento del rol de las glutinatión transferasas en general, e intentar discernir la dirección de las futuras investigaciones en este campo

Los insecticidas actuales y las perspectivas de los nuevos para el futuro / Prospective and opportunistic analysis on insecticides for the future

La importancia de los pesticidas sintéticos orgánicos continuará creciendo acompañando al aumento de la población mundial y en tanto la proporción de tierra cultivable se mantenga relativamente constante. Los pesticidas permiten salvar el 10 por ciento de los cultivos pero todavía un 37 por ciento se pierden anualmente debido a la acción de las plagas. Se pueden tomar a los insecticidas como modelo para ilustrar la necesidad y posibilidades futuras de agroquímicos más eficaces y seguros para el hombre y su medio. Los insecticidas más importantes en ventas constituyen el 88 por ciento del total y actúan a nivel de sólo cuatro blancos moleculares (targets) nerviosos: Acetilcolinesterasa (AChE) el 62 por ciento; Canales de Sodio-dependientes de voltaje el 18 por ciento; Canales de Cloruro-dependientes de GABA (ácido gama aminobutírico) el 6 por ciento y Receptor Nicotínico para la acetilcolina el 2 por ciento. La utilidad de los tres "targets" primeros, será gradualmente comprometida debido a problemas de resistencia de insectos, en tanto que el receptor nicotínico para acetilcolina se espera que crezca significativamente. Los compuestos que actúan sobre targets No-Nerviosos se convertirán progresivamente en mucho más importantes. Dentro de éstos se incluyen a los desacoplantes de la fosforilación oxidativa, a los inhibidores de la NADH/Ubiquinona óxido-reductasa y a los inhibidores de la ATP-asa, a los reguladores del crecimiento (juvenoides, ecdisona) y a los pesticidas microbianos que actúan en varios nuevos targets. Con un panorama de 300 insecticidas comerciales disponibles en la actualidad y la prospectiva de introducción de no más de 2 ó 3 nuevos compuestos por año en promedio, sería esencial que se hiciera un uso lo más efectivo posible de los insecticidas corrientes. Los compuestos químicos más nuevos son en general más complejos y más costosos comparados con los anteriores, pero se los usa en general a dosis mucho menores resultando una relación costo/efectividad que resulta favorable a la economía minimizando además el impacto ambiental. Los nuevos compuestos son en general activos en contra de las cepas resistentes, integrales además a los programas de M.I.P. (manejo integrado de plagas) y suelen poseer una mínima toxicidad en los mamíferos

Glutathion S-transferase activity and DDT-susceptibility of Malaysian mosquitos.

Comparative DDT-susceptibility status and glutathion s-transferase (GST) activity of Malaysian Anopheles maculatus, Culex quinquefasciatus and Aedes aegypti was investigated to ascertain the role of this enzyme in DDT resistance. The standardised WHO dose-mortality bioassay tests were used to determine DDT susceptibility in these mosquitos, whilst GST microassay (Brogdon and Barber, 1990) was conducted to measure the activity of this enzyme in mosquito homogenate. It appeared that DDT susceptibility status of Malaysian mosquitos was not correlated with GST activity.